《表2 反应体系表:ECEL1基因PSCSI-GFP慢病毒载体的构建》

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《ECEL1基因PSCSI-GFP慢病毒载体的构建》


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注:dNTPs是包含dATP、dCTP、dGTP、dTTP的混合物,浓度为10mmol/L混合均匀并经过离心后

参照Promega M-MLV试剂盒说明书,步骤:(1)取1μl Oligo d T(0.5μg/μl)与总RNA2μl混合,加用RNase-Free H2O后配至10μl。混匀并离心;70℃温浴10 min,再冰浴,使Oligo d T和模板退火。(2)参照表2伍配反应体系,加入步骤1制备的混合物。(3)上述体系置于如下条件反应:在42℃温度下,反转录1 h,环境温度70℃下10 min使RTase失活。将所得产物c DNA放置于-20℃低温下保存备用。