《表2 RT-PRA反应体系》

《表2 RT-PRA反应体系》   提示:宽带有限、当前游客访问压缩模式
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《登革病毒逆转录重组酶聚合酶扩增-测流层析试纸条检测方法的建立与评价》


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根据TwistAmpTM exo RT kit(TwistDx,Ltd.,Cambridge,United Kingdom)说明,反应体系如表2,其中,DENV的RNA通过genesig real-time q RT-PCR DENV detection kit(PrimerDesign,Ltd.,United Kingdom)定量,最终反应体系中RNA模板浓度为1500拷贝数。按照表2的反应体系配置混合液,Mg2+和模板最后加入,混合液分装于0.2 m L的TwistAmp Basic RT反应管中,加入Mg2+和模板,吸打混匀。设定反应温度和时间,反应温度(35℃、37℃、39℃、40℃、42℃、45℃),反应时间(2min、5min、10min、15min、20min,25min),建立登革热RPA的最佳反应条件。反应期间用Twista实时荧光计(TwistDx,Ltd.)检测荧光强度,或反应完成后用抗FAM和抗Biotin标记的LFD试纸条进行检测。