《表2 不同菌株的酶活：通过提高胞内辅酶水平促进L-苯甘氨酸的合成》

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《通过提高胞内辅酶水平促进L-苯甘氨酸的合成》

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在单表达及单质粒共表达时NAPRTase和NAD+Syn分别在44 100和30 400处有明显的表达条带，在双质粒共表达时，LeuDH、FDH和NAPRTase的相对分子质量差异较小，均位于为40 000附近，因此在共表达SDS-PAGE分析时三者无法区分，NAD+Syn有明显的表达条带，说明通过该双质粒表达系统成功实现了LeuDH、FDH、NAPRTase和NAD+Syn在E.coli中的共表达。分别测各重组菌粗酶液酶活，以原始菌表达空载pETDuet-1作为对照，结果见表2。重组菌E.col BL21/pETDuet-ldh-fdh LeuDH酶活为18.78 U/mg，是对照的300多倍，FDH酶活为0.34 U/mg，对照组未检测到FDH酶活；重组菌E.coli BL21pACYCDuet-pnc B NAPRTase酶活为2.12 U/mg，是对照的14倍，重组菌E.coli BL21/pACYCDuetnadE NAD+Syn酶活为1.24 U/mg，是对照的41倍，说明NAPRTase和NAD+Syn在E.coli BL21（DE3）中成功过表达。对重组菌E.coli BL21/pETDuetldh-fdh&pACYCDuet-pnc B-nad E的酶活分析发现，LeuDH和FDH的酶活与单质粒菌株E.coli BL21pETDuet-ldh-fdh的酶活差异不明显，而NAPRTase及NAD+Syn的酶活却明显低于重组菌E.coli BL21pACYCDuet-nad E，但高于对照组，酶活结果与蛋白质表达情况一致，说明该双质粒表达体系中各酶均可以有效表达，且重组质粒pACYCDuet-pnc B-nad E的表达对参与转化的LeuDH和FDH的表达影响不大，可能的原因是pET质粒的ColE1复制子强度大于pACYC质粒的p15A复制子[24]。