《表4 PCR反应中的引物及反应条件》

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《土壤nirS、nosZ型反硝化菌群落结构及多样性对牛场肥水灌溉水平的响应》

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注:（1）上下游引物分别标注为F和R；（2）用于PCR T-RFLP实验的上游引物都用6-FAM荧光标记。

反硝化菌群落结构分析采用末端限制性酶切片段长度多态性方法分析（Terminal restriction fragment length polymorphism，T-RFLP），利用反硝化菌nirS、nosZ基因特异引物进行PCR扩增（表4）。PCR产物用Mini BEST DNA Fragment Purification Kit VER 4.0（TaKaRa）试剂盒进行纯化回收，回收后的目的基因经限制性内切酶HhaI（TaKaRa）酶切分析。酶切后所得产物送至生工生物工程（上海）股份有限公司进行毛细管电泳检测。将获得的T-RFLP数据继续进行处理，去除结果中小于50 bp及相对丰度小于1%的酶切片段。