《表4 PCR反应的条件及引物》

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《筛选金线莲种质资源的通用DNA条形码序列及鉴定其混伪品》


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为了使扩增效果更好,我们对四个候选条形码(ITS,rbcL,matK and psbA-trnH)PCR反应条件中的退火温度设置了6个梯度进行利摸索,最终筛选出了扩增效果最佳的退火温度、PCR反应条件和引物(表4);PCR反应总体系为30μL:2×Taq PCR Mix(Real-time Biotechnology (Beijing)Co.Ltd.) 15μL,DNA模板2μL,引物各1.5μL(Invitrogen Biotechnology Co.Ltd),ddH2O 10μL。PCR扩增产物用1%的TAE琼脂糖凝胶电泳检测,用凝胶成像系统分析。然后,按照凝胶回收试剂盒(Sangon Biotech (Shanghai)Co.,Ltd.) 操作回收纯化测序产物,纯化后的产物使用ABI3730XL测序仪进行双向测序。