《表1 各检测指标的上下游引物序列》

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《不同频率电针百会、水沟穴对大鼠血脑屏障开放效应及调控机制》

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提取总RNA，加入200μL氯仿，4℃、12 000r/min离心15min并取500μL上层水相；加500μL异丙醇；加1m L 75%乙醇洗涤RNA沉淀；置于真空浓缩仪内干燥RNA沉淀至半透明；取RNA样品液3μL加入597μL DEPC处理水，采用紫外吸收法测定RNA的浓度、纯度及完整性。多功能酶标仪测得OD比值（260nm/280nm）在1.8-2.0者，认为RNA纯度较高，计算其总RNA浓度，进行逆转录。引物设计由Ta Ka Ra公司设计合成并质量检验。各指标引物见表1。退火温度:分8个梯度，分别作复孔，共16孔，按照测出的退火温度做标准曲线。共测6个浓度，分别作3孔。选择合适的退火温度。PCR反应过程:1→95.0℃30s；40→95.0℃5s→60℃30s，95.0℃15s→60℃30s→95.0℃15s。PCR产物的定量校正和判定分析采用2-ΔΔCt法。