《表1 Pannexin-1、KIM-1、NGAL及β-actin引物序列》

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《阻断pannexin-1可减轻肾脏组织炎症细胞浸润和缓解顺铂诱导的急性肾损伤》

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Trizol试剂提取总RNA，并溶于无RNAse水中，紫外分光光度计测定A260/A280的比值1.8～2.0。按TaKaRa PrimeScriptTMRT Master Mix试剂盒说明进行cDNA合成。人Pannexin-1、鼠Pannexin-1、鼠Kim-1、鼠NGAL及人和鼠内参β-actin引物序列由北京擎科新业生物技术有限公司合成，引物序列见表1。待测cDNA加入20μL反应体系中，按照TaKaRa SYBRR Premix Ex TaqTM试剂盒说明在LightCycler R480型荧光定量PCR扩增仪进行定量检测。PCR反应条件:95℃30 s变性，95℃5 s，60℃30 s循环40次，95℃5 s，60℃60 s融解，50℃30 s降温。融解曲线分析表明PCR反应产物为单独的双链DNA。每一个样品目的基因扩增的循环数（Ct）都依据β-actin做校正，得出ΔCt（Ct样品目的基因-Ct样品的β-actin）。目标基因表达差异以经过处理的样本相对于未经处理的样本的倍数表示，即检测基因的差异=2-ΔΔC（ΔΔCt=ΔCt处理样品–ΔCt未处理样品）。