《表1 IL-6、TNF-α及β-actin的引物序列》

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《电针“足三里”及其腹部配穴对术后肠麻痹小鼠肠动力的影响》

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小鼠于造模结束禁食24 h后，腹腔注射1%戊巴比妥钠（50 mg/kg）麻醉，快速打开腹腔，在冰盒上分离肠道取出胃下部分段肠道，并分离出肠肌层，采用实时荧光定量PCR法检测IL-6、TNF-αm RNA的表达水平，操作如下：（1）取冻存小鼠肠组织50 mg，按Trizol（total RNA isolation）说明书提取肠肌层总RNA，取总RNA 5μg，按c DNA逆转录试剂盒说明进行逆转录合成c DNA，总反应体系为20μL。(2）采用SYBRGreenⅠ染料PCR法，反应体系为：SYBR Premix Ex Taq TMⅡPCR 12.5μL，上游引物1μL，下游引物1μL，RNase-free Water 8.5μL，c DNA 4μL，总反应体系为25μL，PCR反应条件为：95℃预变性60 s，95℃变性15 s，60℃退火延伸60 s，扩增设定为40个循环。反应结束后，由计算机自动分析各样本的Ct值，即达到一定的荧光阈值的循环数。考虑到各个样本总RNA水平的差异，采用内参基因β-actin进行校正，按照2-△△Ct法得到相应指标相对表达量。引物序列及扩增长度见表1。