《表1 引物序列：褪黑素核受体RORα对小鼠睾丸间质细胞凋亡的作用》

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《褪黑素核受体RORα对小鼠睾丸间质细胞凋亡的作用》

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采用RNAiso Plus法提取细胞的总RNA，反转录为cDNA，用于实时荧光定量PCR实验。按照TaKaRa反转录试剂盒要求，检测RNA的浓度及OD值，每1μg RNA反转20μL体系的cDNA。本实验检测细胞凋亡相关的Bcl2、Bax基因引物序列见表1。引物序列由上海生工生物技术有限公司设计并合成，并利用PCR仪进行引物验证，寻找引物的最适反应条件。利用荧光定量PCR检测在不同处理TM3的情况下Bcl2、Bax的mRNA表达量，荧光定量PCR反应体系:TB Green Premix Ex TaqⅡ10μL（1×）、Forward primer 0.8μL（0.2μmol/L）、Reverse primer 0.8μL（0.2μmol/L）、ROX reference DyeⅡ0.4μL、cDNA 2μL、ddH2O至20μL。反应条件:95℃预变性30 s；95℃变性5 s，59℃退火34 s，95℃复性15 s，扩增40个循环。