《表2 基因引物合成信息:BMAL1对小鼠睾丸间质细胞凋亡的影响》

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《BMAL1对小鼠睾丸间质细胞凋亡的影响》


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采用RNAiso Plus(TaKaRa)提取小鼠睾丸间质细胞的总RNA,并反转录为cDNA,用于qRT-PCR实验,根据TaKaRa的反转录试剂盒要求,利用RNA的浓度值计算反转录20μL cDNA所需的RNA量。本实验所需的基因引物序列见表2。引物由上海生工生物技术有限公司设计及合成,并利用PCR仪进行引物验证,摸索引物的最适反应条件。利用荧光定量PCR仪对BMAL1 siRNA组和BMAL1 siRNA NC组进行相关基因的分析。反应体系:SYBR Premix Ex TaqⅡ10μL、Forward primer 0.8μL(0.4μmol/L)、Reverse primer 0.8μL(0.4μmol/L)、ROX reference DyeⅡ0.4μL、cDNA 2μL、ddH2O至20μL。反应条件:95℃预变性30 s;95℃变性5 s,40个循环;56(59)℃退火34 s,扩增40个循环。运用2-△△Ct方法进行数据分析。