《表1 Real time PCR法检测WNT4和β-actin引物序列Tab.1 Primer sequences of WNT4andβ-actin detected by Real time P

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《沉默WNT4基因对稳定转染PAX2基因大鼠肾小管上皮细胞迁移和侵袭能力的影响》

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将各组细胞中加入1mL RZ裂解液，充分混匀，充分振荡，缓慢加入0.5倍体积无水乙醇，混匀，室温放置2min，4℃、12 000r·min-1离心2min，所得即为样本总RNA。在波长260nm处测定待测RNA样品A值。反转录合成cDNA:加入1μL（200U）TIANScript M-MLV，采用移液器轻轻混匀。42℃温浴50min。95℃加热5 min终止反应。按照试剂盒要求，配制20μL PCR反应液（冰上操作），引物序列见表1。反应条件为95℃、10min，95℃、10s，60℃、20s，35个循环；72℃、30s，4℃、5min，4个循环；熔解曲线条件（由机器自行设定）:95℃、15s，60℃、1min，95℃、15s。采用相对定量方法RQ=2-△△Ct计算WNT4基因mRNA的相对表达量。ΔΔCt=（实验样品Ct-内参基因Ct）-（基准样品Ct-内参基因Ct）。