《表1 多态性位点信息:整合素基因多态性与胃癌发病风险的相关性》

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《整合素基因多态性与胃癌发病风险的相关性》


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以中国人群最小等位基因频率为0.05。基因多态性位点位于整合素家族基因上,见表1。所选择的基因分型采用美国Sequenom公司MassAR-RAY平台进行分析。该平台分析基因型主要为以下几个步骤:(1)PCR扩增反应:采用多重PCR扩增含有多态性位点的序列片断;(2)SAP纯化:SAP是一个纯化的过程,主要采用虾碱酶(shrimp alkaline phosphatase,SAP)来消化PCR扩增体系中多与的dNTPs和引物;(3)Iplex单碱基延伸反应:利用多重PCR扩增后的产物,针对该位点再设计一条延伸引物,延伸引物在iplex酶的作用下进行单碱基延伸反应。根据SNP位点的不同,探针将结合不同的ddNTP,从而具有不同的分子量,质谱仪即可检测出这种分子量差异,从而实现SNP分型的目的;(4)树脂纯化:向每个反应体系中加入Clean Resin(树脂),混匀15 min后离心5 min,其目的是为了去除前三步反应中残余的杂质;(5)点样:使用MassArray点样仪将制备好的样本点到检测芯片的相应位置上;(6)质谱分析:利用MALDI产生离子常用飞行时间(Time-of-Flight,TOF)检测器来检测不同的核酸片断,不同的等位基因会产生不同的质谱牲,从而得到相应的检测结果;(7)结果分析:使用SequenomTyper 4.0 Software观看和分析实验结果,得出不同的基因型。