《表3 不同转染试剂与pcDNA3.1-EGFP质粒的剂量》

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《3种转染试剂对牛原代骨骼肌卫星细胞转染条件的优化》

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待细胞生长至约70%汇合度时转染pcDNA3.1-EGFP或pEG-FP-C1质粒，转染步骤严格按照每种转染试剂的说明书进行操作。不同转染试剂与pcDNA3.1-EGFP和pEGFP-C1质粒的用量见表2。不同转染试剂与pcDNA3.1-EGFP质粒的用量见表3，其中Lipofectamine 3000设置1.5、1.0和0.75μL 3个梯度，各梯度对应质粒用量为1.0μg；X-tremeGENE HP设置1.5、1.0和0.75μL 3个梯度，各梯度对应质粒用量为0.5和1.0μg；FuGENE HD设置1.5、2.0、3.0和4.0μL 4个梯度，各梯度对应质粒用量为1.0μg。细胞转染后24h（GM期）诱导分化或用Hoechst 33342染色液染色，采用倒置荧光显微镜观察转染后24h（GM期）、分化72h（DM3期）及Hoechst 33342染色后荧光信号并采集图像。每个生物学重复至少采集3个视野，分别计数3个200倍视野的细胞总数及EGFP阳性细胞数，然后计算转染效率。