《表1 qRT-PCR反应体系》

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《地黄磷酸丙糖异构酶基因的克隆与空间表达》


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利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测RgTPI基因在地黄根、茎、叶中的表达情况。RgTPI基因引物序列为F:5'-TCGGCGGCAACTGGAAATG-3',R:5'-ATGAAAATCAGGTCGCAGAGAACTT-3',引物序列合成于英潍捷基(上海)贸易有限公司,产物长164 bp。以TIP41基因(引物F:TGGCTCAGAGTT-GATGGAGTGCT,R:CTCTCCAGCAGCTTTCTCGGA-GA)作为内参基因。qRT-PCR反应体系见表1。qRT-PCR扩增程序:95℃预变性3 min;95℃变性30 s,60℃退火30 s,72℃延伸30 s,35个循环;72℃终延伸5 min。采用2-ΔΔCt分析方法对RgTPI基因进行相对表达量分析。