《表2 Kp ADH的Y127位点突变体对CPMK的还原活力》

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《醇脱氢酶KpADH的127位点对催化活性和对映选择性的影响》

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纯化后的野生型醇脱氢酶WTKp ADH对CPMK的比活力为14.6U/mg（表2），生成产物（R）-CPMA，e.e.值为82%，服从anti-Prelog规则。突变体Y127V和Y127I对CPMK的还原活力为95.0U/mg和84.0U/mg，分别是WTKp ADH的6.5倍和5.8倍，127位点由酪氨酸（lg P=-1.3）突变为强疏水性的缬氨酸和异亮氨酸（lg P分别为4.2和4.5），增强了该酶底物结合口袋的疏水作用。但是127位点突变为疏水性的亮氨酸（lg P=3.8）后，对CPMK的比活力降低到了5.27U/mg，突变为苏氨酸（lg P=-0.7）后几乎丧失还原CPMK的活性。大多数氨基酸仅有一个取代基与氨基酸C-β位相连，但是缬氨酸、异亮氨酸和苏氨酸C-β位都有两个取代基，这意味着侧链基团在肽键附近占据更大的体积并且约束了氨基酸主链的构象[17]。综上，127位点疏水性的增强及氨基酸空间位阻变化的协同作用增强了突变体对CPMK的还原活性。