《表1.构建突变株RZΔomp WΔgtx A所需引物》

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《鸭源鸡杆菌ompW、gtxA双基因缺失株的构建及其相关特性分析》

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以鸭源鸡杆菌基因组为模板，利用引物gtx A-U-F/gtx A-U-R与gtx A-D-F/gtx A-D-R扩增获得gtx A基因上下游同源臂。同时以p BC-Tn903质粒为模板PCR扩增获得卡那霉素筛选标记。用Xma I和Bam H I对回收纯化上游同源臂双酶切构建p MD18T-U质粒。回收纯化的下游同源臂和p MD18T-U质粒经Bam H I和Pst I双酶切构建p MD18T-U-D，然后将该质粒和抗性标记片段经Bam H I单酶切、碱性磷酸酶处理后进行连接构建p MD18T-U-K-D，将其转入DH5α感受态细胞，挑选转化菌落，PCR、酶切鉴定为阳性的转化子进一步序列测定，序列鉴定正确后，保存备用。