《表1 构建ΔRah U菌株所用引物》

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《铜绿假单胞菌表面(氧化)低密度脂蛋白配体的研究》

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参照Rao等所述，利用等位替换原理构建ΔRahU菌株[8]。LB固体平板过夜活化-80°C冻存的P.aeruginosa CMCC10104。次日，挑取单菌落于LB液体培养基，在恒温摇床中37°C、200 r/min培养。培养至OD600约为0.8左右，将菌体收集后提取P.aeruginosa基因组DNA。以提取得到的DNA为模板，利用表1中的引物分别扩增Rah UU及Rah UD基因片段。PCR反应体系（20μL）:模板0.5μL，2×PCR master mix 10μL，20μmol/L引物各1μL，ddH2O 7.5μL。PCR反应条件:94°C 1 min；94°C30 s，55°C 30 s，72°C 50 s，30个循环；72°C 5 min。得到的PCR产物用1%的琼脂糖凝胶电泳鉴定。