《表1 外泌体分离方法对比》

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《动物外泌体分离方法的研究进展》

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动物外泌体分离方法的优劣性对比如表1所示。差速离心法作为一种成熟稳定的分离手段如今依然被广泛使用，但差速离心分离过程耗时，在分离血浆外泌体时会参杂有白蛋白[25，48]，且频繁的离心导致外泌体的回收率降低，分散性较低[28，39]。在差速离心前对样品进行0.22μm滤器过滤处理可降低产品的蛋白质污染[37]。在传统差速离心分离基础上改良的密度梯度离心分离可同时保证外泌体的纯度、回收率及分散性[24，27-28]，但密度梯度离心体系的建立对熟练度的要求较高。基于免疫亲和力的外泌体分离产品纯度高，但样品容量低，且受制于抗体的开发程度及外泌体标记蛋白（抗原）的认知程度[27]，却不失为一种极佳的产品纯化手段，可用于超速离心分离或沉淀分离后产品的后处理，提高外泌体纯度[26，31，34]。外泌体沉淀分离的样品容量及产量均高于超速离心分离[38]，但外泌体可能会受到试剂污染，且分离时外泌体可能会与样品内的蛋白质（如血液中的白蛋白）及其他EVs共沉淀，影响下游分析[31，34，39-40，46]，因此常常需要额外的纯化步骤保证产品质量，如对产品进行SEC纯化[24，37]或免疫磁珠吸附纯化[34]等。基于分子尺寸的外泌体分离无需耗时繁琐的离心，产品不受试剂污染影响，分离效果良好。SEC的血液外泌体产品中白蛋白的含量较差速离心分离及沉淀分离的低[24，45-46，48]，超滤浓缩器结合SEC分离的外泌体质量可媲美密度梯度离心分离[24]。但过滤分离也存在缺陷，有研究比较了基于膜过滤的exo Easy kit与q EV column在血浆外泌体的分离表现后发现，前者外泌体产量较高，但产品中白蛋白的含量较后者高[47]，且q EV column在分离细胞培养液的外泌体时存在非囊泡聚合物共分离的情况[31]。微流体技术结合传统的外泌体分离提纯方法已有许多案例，因其样品需求量少、分离鉴定自动化集成化及适用于临床即时诊断等优势而受到广泛关注，但当前用于外泌体分离的微流体装置普及程度低，因此此类技术未被广泛检验，随着外泌体这一新型生物标记日渐受到重视，这类技术将很快可以为外泌体的分离与鉴定服务[58-59]。