《表1 DLEC1基因扩增引物序列》

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《DLEC1基因启动子区甲基化状态与食管胃结合部癌变过程的关系》

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甲基化特异性PCR（MSP）反应体系为2×GoldStar Taq Master Mix（康为世纪公司）10μL，取2μL（约200ng）DNA模板，用亚硫酸氢盐处理，上下游引物各0.5μL，用超纯水补齐，约7μL。DLEC1基因扩增所用引物的序列设计参考以往文献[1]（见表1）。甲基化与非甲基化MSP反应条件均为95℃加热10min，95℃加热45s，52℃加热45s，72℃加热90s，此循环进行35次，最后72℃加热10 min。MSP产物采用2.0%琼脂糖凝胶电泳（含0.5μg/mL溴化乙啶）。用UV凝胶电泳成像及图像分析系统进行图像分析。MSP阳性对照采用基因组DNA经甲基化酶SssⅠ处理以后进行PCR，阴性对照用灭菌双蒸水取代DNA模板进行PCR。MSP检测的质量控制为随机选取10%标本进行重复实验。