《表4 RT-PCR反应体系》

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《三叶青块根发育时期RT-qPCR内参基因的筛选与体系建立》

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本实验选取的模板c DNA为三叶青c DNA，经PCR扩增获得4种内参基因目的片段。PCR体系为（表4）:Super Taq Mix 12.5μL，上游引物0.5μL，下游引物0.5μL，模板0.5μL，dd H2O补足至25μL。PCR反应条件为：94℃预变性，3 min；（94℃30 s变性；58℃30 s退火；72℃30 s延伸）进行35个循环；最后进行72℃延伸，10 min；4℃，降温处理（Hold）。所获得的扩增产物，经预制的琼脂糖凝胶（1.5%）进行电泳检测，确保单一明亮条带并与目的片段大小一致。