《表1 本研究所涉及的引物》

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《MrXrn1基因参与调控罗伯茨绿僵菌的产孢和致病》

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以野生型基因组DNA为模板，根据引物对（Xrn1-5F/5R和Xrn1-3F/3R）进行PCR扩增，分别获得该基因5′端和3′端的片段（其中，上游、下游片段的长度分别为980和1016 bp）；随后利用一步克隆法将上游和下游片段（基于表1中划线部分同源序列）分别连接到双元载体p DHt-SK-bar以获得敲除质粒，再转入根癌农杆菌AGL-1中；将上述的农杆菌与野生型绿僵菌共培养以获得相关转化子并筛选候选基因敲除突变体。此外，设计相应Mr Xrn1基因的回补引物Xrn1Comp-5F/3R，PCR扩增获得包括Mr Xrn1基因的全长序列，连接到双元载体p DHt-SK-ben以获得回补质粒；随后以Mr Xrn1基因敲除突变株为出发菌株，利用上述农杆菌介导的遗传转化（Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation，At MT）方法进行转化，筛选获得候选基因回补菌株。本研究所涉及的引物见表1。