《表1 Real-time PCR引物信息》

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《IGF-1调控RBM3表达抑制低温应激诱导牦牛卵丘细胞凋亡》

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根据GenBank公布的牦牛的RBM3 m RNA序列设计RBM3检测引物，Bax和Bcl-2 mRNA检测引物参照笔者前期研究所用的引物序列[13，17]，具体信息及反应条件见表1。反应体系主要包含1μL cDNA模板，终浓度为0.25μmol·mL-1的上下游引物各0.8μL，2×SYBR GreenⅡPCR mix 10μL，加ddH2O使终体积达到20μL。反应条件：94℃预变性15 s，94℃预变性10 s，退火10 s（具体温度见表1）、72℃延伸10 s，共35个循环，所有荧光定量PCR仪为Roche 480。内参基因为β-actin，重复至少3次。采用相对定量分析法评估基因表达水平[18]。