《表1 Blf Ff G系列菌株中Blf Ff基因和HAC1基因拷贝数》

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《基因拷贝数对重组毕赤酵母的牛乳铁蛋白功能片段表达及细胞存活率的影响》

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在已经构建得到的Blf Ff基因单拷贝重组毕赤酵母Blf Ff G01菌株基础上[17]，将HAC1、Kex2（信号肽切割酶基因）基因按照已建立的方法[21]转入重组毕赤酵母Blf Ff G01，筛选得到Blf Ff G02号菌株。该菌株表达量相比Blf Ff G01有所提高，但提高幅度不大。由于Blf Ff G02菌株的Blf Ff、HAC1基因均只有1拷贝，而拷贝数对于基因的高效表达具有显著影响，因此，利用核糖体r DNA的NTS同源整合的方法结合PTVA技术来提高重组菌株中的基因拷贝数。将r DNA-NTS-Blf Ff克隆表达盒整合到Blf Ff G02号菌株的NTS区域，筛选获得Blf Ff G03菌株。进一步以Blf Ff G03菌株为出发菌株，利用PTVA技术扩增拷贝数，筛选到不同Blf Ff基因拷贝数的菌株。各菌株基因拷贝数如表1所示。