《表1 实时定量PCR实验中引物序列》

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《Cereblon在沙利度胺抑制人肺腺癌A549细胞迁移中的作用》

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稳定表达的A549CRBN和A549luciferase细胞分别铺于6孔板，培养至每孔生长约铺满70%时，分别加入100μmol/L沙利度胺及含1‰DMSO的培养基（空白对照组）处理，培养箱中继续孵育24 h，加入500μl TRIzol提取细胞总RNA，随后将RNA反转录成cDNA，再采用SYBR Green Real-time PCR Master Mix Plus试剂盒，20μl体系扩增：10μl SYBR Green Mix(2×）、2μl cDNA、0.4μl上下游引物（10μmol/L）、余下用去离子水补齐。扩增条件为：95℃5 min预变性，95℃30 s和60℃30 s，进行40个PCR循环。完成实时定量PCR后对其熔解曲线进行分析。使用肌动蛋白（β-actin）为内参基因，实验所用到的引物见表1。每个实验样品重复3次，用2-△△Ct法对基因表达进行定量分析，△△Ct计算如式（2）。