《表1 引物信息：鸡Prox1蛋白核定位信号的预测与鉴定》

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《鸡Prox1蛋白核定位信号的预测与鉴定》

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下划线指示Eco RⅠ和Bam HⅠ酶切位点；*：引物pEGFP-M/NLS上的酶切位点来自XhoⅠ和HindⅢ

根据鸡Prox1基因序列（Gen Bank No.NM＿001005616.1），利用Primer Premier 5.0软件设计鸡Prox1蛋白截短体重组真核表达载体特异性引物（表1），由昆泰锐（武汉）生物技术有限责任公司合成。以本实验室保存的鸡Prox1基因重组质粒p EGFP-C1-Prox1为模板进行PCR扩增。PCR反应体系为：质粒1μL，2×Taq mixture 10μL，10μmol/L上下游引物各1μL，加dd H2O至20μL。PCR反应程序：94℃预变性5 min；94℃变性40 s，62℃退火50 s，72℃延伸1 min，30个循环；72℃延伸10 min。PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测并对目的条带进行胶回收纯化，然后用Eco RⅠ和Bam HⅠ对纯化产物和真核表达载体p EGFP-C1分别进行双酶切，将酶切片段纯化、连接并转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，挑取单菌落进行菌液PCR和双酶切鉴定。将鉴定正确的重组质粒送昆泰锐（武汉）生物技术有限责任公司测序。