《表1 Abvb UPO酶级联反应产物得率表》

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《双孢蘑菇来源非特异性过氧合酶在毕赤酵母中的表达及生化表征》

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如上文所述，Abvb UPO不耐受高浓度的H2O2，因此采用原位生成H2O2的酶级联反应代替一次性加入过量的H2O2作为共底物[14，23]。本实验原位生成H2O2方法（图8）是使用氯化胆碱作为电子供体，通过来自烟草节杆菌来源的胆碱氧化酶还原分子氧来产生H2O2。β-苯乙醇是一种重要的食用香精香料，被广泛地应用在食品风味提升工艺之中[24]，而它的底物乙基苯也是UPO的常用底物[14]，因此利用该催化反应验证Abvb UPO级联催化反应活性可行性。气质联用分析结果表明（图9），保留时间为4.74 min、9.07 min和9.15 min的产物分别为乙基苯、β-苯乙醇及苯乙酮。Abvb UPO能够氧化乙基苯为β-苯乙醇，且4 h内转化率可达14.40%，但随后转化率逐渐降低，推测是该酶热稳定性弱，长时间30℃孵育会造成酶活力的损失，同时产物中伴有副产物苯乙酮，因为反应过程中苯乙醇产物被Abvb UPO继续氧化，导致了苯乙酮的生成。Frank Hollmann等人[5]研究Aae UPO羟基化乙基苯的反应实验表明，反应前期苯乙酮会大量增加，因为苯乙醇的积累抑制了过氧化，在反应30～60 min时苯乙酮增长速率开始下降并且趋于稳定。本实验表明，Abvb UPO能与胆碱氧化酶实现级联催化反应，使Abvb UPO在有机合成及相关领域具有很大的应用潜力。