《表3 山核桃Cc KO在核桃体胚(SE)不同培养代数中的阳性率统计》

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《山核桃贝壳杉烯氧化酶基因CcKO的克隆和表达分析》

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选取生长良好的核桃体胚进行遗传转化（图6A）。用制备好的35S∷Cc KO∷GFP过表达载体的农杆菌工程菌液侵染核桃体胚。E0代体胚培养至2周左右，在子叶表面会出现颗粒状E1代体胚。体视荧光显微镜下可以观察到核桃体胚的发育经历了球形胚、心形胚、鱼雷胚以及子叶胚阶段（图5）。在白光视野下，转化体胚和对照体胚均呈白色透明状。在蓝光激发下，经转化获得的GFP阳性体胚表达出强烈的绿色荧光信号，而未转化成功的体胚及对照体胚无荧光信号（图5）。通过荧光检测计算GFP体胚阳性率，结果显示:E1代转化体胚GFP阳性率为46%；将E1代GFP阳性体胚培养至E2代，GFP阳性率为65%；E3代的GFP阳性率为83%（表3）。