《表2 核桃体胚培养代数对阳性率的影响》

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《山核桃赤霉素氧化酶基因CcGA3ox的克隆和功能分析》

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目前，由于山核桃体细胞胚遗传转化体系还不够成熟，笔者选取同属于胡桃科生长健壮的核桃体细胞胚作为遗传转化的初始材料（图6-A～B），用制备好的35S::Cc GA3ox::GFP过表达载体的农杆菌工程菌进行侵染，将农杆菌侵染的体胚记为E0代，所选用的E0代体胚均由一个体细胞胚分化而来，再将E0代其表面增殖的胚状体记为E1，以此类推。培养至E3代，体式荧光显微镜下观察发现，转化体细胞胚生长健壮，可正常发育和增殖，与对照体胚相似，其发育过程经历了4个时期，分别为球形胚、心形胚、鱼雷形胚以及子叶形胚阶段。在白光视野下，对照体胚和转化体胚形态相似，均为白色透明状；在蓝色激发光（488 nm）条件下，35S::Cc GA3ox::GFP阳性转化核桃体胚呈现明亮的绿色荧光（该类体胚定为GFP阳性体胚），而对照体胚呈现较弱的绿色荧光（图6）。数据统计结果表明，E1代体胚GFP阳性率为32%；E2代体胚GFP阳性率为56%；E3代体胚GFP阳性率为77%，说明转化的体细胞胚能够稳定遗传（表2）。