《表1 CSF1PO和D18S51基因座的引物序列》

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《基于Ion Torrent PGM~(TM)测序平台的CSF1PO和D18S51基因座分析》

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注:扩增子大小参考的基因组版本号为GRCh38；F表示正向引物，R表示反向引物

采用Primer3Plus工具设计CSF1PO和D18S51基因座的引物，使用美国国立生物技术信息中心（National Center for Biotechnology Information，NCBI）的BLAST誖（https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi）进行引物特异性验证[12]，引物序列见表1。使用QIAGEN Multiplex PCR试剂盒（德国QIAGEN公司）进行PCR扩增，反应体系为20μL，包括:复合引物（0.2μmol/L）各0.5μL，2×PCR反应混合物10μL，DNA模板1 ng，加水补至20μL。PCR反应条件:95℃10 min；94℃30 s，61℃90 s，72℃60 s，10个循环；94℃30 s，59℃90 s，72℃60 s，20个循环；60℃30 min；4℃保存。PCR产物用1%琼脂糖凝胶电泳进行检测。PCR产物采用Agemourt AMPure XP磁珠（美国Beckman Coulter公司）纯化后采用QubitTMdsDNA HS Assay试剂盒和Qubit誖2.0荧光计进行定量检测。