《表1 引物信息:片仔癀对大肠癌细胞Hedgehog信号通路调控的体内外研究》

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《片仔癀对大肠癌细胞Hedgehog信号通路调控的体内外研究》


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6孔板每孔接种2×105个对数生长期的HT-29细胞,过夜培养后分别进行不同浓度的PZH给药干预,继续常规培养24 h。用Trizol法[11]提取各孔总RNA,取lμg总RNA反转录为c DNA,以此为模板进行PCR实验,检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、Bcl-XL、Bax、Survivin、Shh、Ptch、Smo、Gli1的m RNA水平检测,以GAPDH基因作为内参。反应体系为20μL,反应条件:94℃预变性2 min,94℃变性30 s,54~61℃退火30 s,72℃延伸30 s,30个循环,循环结束后72℃8 min。PCR产物用琼脂糖凝胶电泳及凝胶成像分析。PCR引物序列见表1。