《表1 引物序列：天名精根提取物调控TLRs信号抑制RAW264.7细胞炎症的研究》

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《天名精根提取物调控TLRs信号抑制RAW264.7细胞炎症的研究》

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取对数生长期细胞，调整细胞密度为1×105个/mL，接种于12孔板，每孔1mL，置于培养箱贴壁培养24h，分为正常对照组（不加干预的RAW264.7细胞），炎症模型组（2μg·mL-1 LPS孵育RAW264.7细胞6h或MOI=5的SAC孵育RAW264.7细胞3h），ECA组（100μg·mL-1 ECA与LPS共同孵育6h或与SAC共同孵育3h），PCA组（100μg·mL-1 PCA与LPS共同孵育6h或与SAC共同孵育3h）。细胞处理结束后，收集细胞，以Trizol法提取各组细胞中的总RNA，紫外分光光度计测定总RNA的纯度及浓度。根据反转录试剂盒说明书反转录合成cDNA第一链，采用荧光定量PCR进行扩增，每样本设3个复孔。所有引物由上海生工生物技术有限公司合成，序列如表1所示。扩增条件:95℃预变性5min，95℃10s，60℃30s，72℃5s，扩增40个循环。mRNA相对表达量计算采用Ratio=2-ΔΔCT方法，ΔCT1=对照组目的基因CT值-对照组内参基因CT值，ΔCT2=实验组目的基因CT值-实验组内参基因CT值，ΔΔCT=ΔCT2-ΔCT1，代入公式2-ΔΔCT计算，即得到mRNA相对表达量。