《表1 柯萨奇病毒B组5型（CV-B5）全基因组序列分段引物》

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《天津市致病毒性脑炎柯萨奇病毒B组5型全基因组序列分析》

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参照文献[18]设计的2对EV-B通用引物C004/EV-CRE-R与EVB-4110-F/EVB-7400-R（表1），分两段扩增CV-B5全基因组序列，2段序列间有400bp的重叠区域。利用Prime Script?II High Fidelity One Step RT-PCR Kit对CV-B5全基因组序列进行RT-PCR扩增。反应体系：2×One Step High Fidelity Buffer 12.5μl，Prime Script II RT Enzyme Mix 0.5μl，Prime STAR GXL for 1 step RT-PCR 2μl，上下游引物（20μM）各0.5μl，RNA模板5μl，RNase Free d H2O补至25μl。反应条件：45℃15min；94℃2 min；98℃10 s，55℃15 s，68℃1 min，共50个循环；4℃保持。扩增产物经QIAquick?Gel Extraction Kit纯化后用Qubit定量。