《表1 实时定量RT-PCT引物》

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《携载FGF2基因的改性壳聚糖微球促进兔桡骨骨缺损修复的研究》


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将BMSCs按照5 000个/孔接种于6孔板中,每孔加入2 m L完全培养基,置培养箱培养过夜,待细胞贴壁后加入含HBC@TACS-pFGF2基因载体微球的DMEM,其中p FGF2质粒浓度为100μg/m L。分别培养3 d、7 d后弃去培养基,PBS冲洗2遍TRIzol裂解细胞,提取RNA。用PrimeScript RT Enzyme Mix I将RNA逆转录合成cDNA。用荧光SYBR Green QPCR Master Mix(TakaRa)进行PCR(表1)。应用Applied Biosystem7300/7500和StepOnePlus Real-Time PCR System进行实验。PCR反应预变性温度:95℃,30 s,1个循环。循环反应温度:95℃,5 s;60℃,30 s,40个循环。扩增结果用QuantStudio Real-Time PCR Software进行分析。