《表1 LAMP技术在植物病原真菌检测中的应用》

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《环介导等温扩增技术在植物病原物检测中的应用》

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Duan et al.(2013；2014a）分别以灰霉病菌B.cinerea的Bcos5及十字花科菌核病菌Sclerotinia sclerotiorum的Ssos5为目标基因进行LAMP反应，最适反应温度为63℃，时间45 min，通过加入HNB染料实现了对灰霉病菌及十字花科菌核病菌的可视化检测，HNB染色法结果与凝胶电泳结果一致，表明LAMP技术检测结果可靠；该技术对灰霉病菌和十字花科菌核病菌的检测极限分别是10-3 ng/mL和0.1 fg/μL，是普通PCR检测灵敏度的10倍和1 000倍。LAMP技术与DNA提取试剂盒结合，可有效地检测不同品种水稻种子上的水稻恶苗病菌及稻瘟病菌，如Ortega et al.(2018）利用LAMP技术分别对水稻恶苗病菌的伸长因子EF-α序列及稻瘟病菌钙调蛋白序列检测，检测极限分别为100～999 pg/μL和10～99 pg/μL DNA。此外，Villari et al.(2017）将q LAMP技术与孢子陷阱捕捉系统相结合，在症状出现前的12 d，距离最近的潜在侵染源6 m处就能检测到空气中的10个分生孢子，成功实现了对引起黑麦草叶片灰斑病病原菌——稻瘟病菌的特异、快速且定量检测。Chen et al.(2013）针对瓜类疫霉病菌Phytophthora melonis的Ras相关蛋白的Ypt1基因分别进行了LAMP技术、PCR技术及巢式PCR技术检测，LAMP技术与巢式PCR技术的检测极限均为0.4 fg/μL，比普通PCR技术灵敏1 000倍，且LAMP技术检测更简便、快速且成本低廉，所以LAMP技术在瓜类疫霉病菌的检测方面更具潜力。当LAMP技术与DNA快速提取技术结合后，具有高度的特异性与灵敏度，如Kong et al.(2016）利用LAMP技术进行特异性扩增后，将葡萄霜霉病菌Plasmopara viticola从其它38种病原物中鉴定出来，并且在30 min内完成了低于1.32 fg/μL目标DNA的检测，该技术同样可用于葡萄霜霉病菌的田间检测，为葡萄霜霉病防控适期的确定提供指导。赵媛媛等（2019）利用LAMP技术成功检测了引起玉米茎腐病的强雄腐霉Pythium arrhenomanes，且在60 min内即可快速、准确地获得检测结果，最低检测灵敏度为10 pg/μL，比普通PCR灵敏1 000倍，能够满足现场快速检测的要求（表1）。