《表1 RT-PCR引物信息》

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《上笼应激对绍兴鸭十二指肠组织结构、抗氧化能力及基因m RNA表达量的影响》

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采用Trizol法提取各肠组织样总RNA，利用琼脂糖凝胶电泳检测总RNA的质量。按照Toyobo反转录试剂盒（Toyobo biotech公司，日本）说明书将RNA反转录为cDNA。然后以cDNA为模板进行实时荧光聚合酶链式反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，RT-PCR）。采用Primer 5.0软件设计引物序列（表1），由北京擎科生物技术有限公司合成。使用SYBR Green反应混合液试剂盒（南京诺唯赞生物科技有限公司）在LightCycler 96荧光定量PCR仪（Roche公司，瑞士）上进行反应。反应体系为:10μL 2×AceQ荧光定量PCR SYBR Green反应混合液，上游引物和下游引物（10μmol/L）各0.4μL，0.4μL 50×ROX标准染料，100 ng cDNA模板，加ddH2O至20μL。反应程序：95℃预变性30 s；95℃变性10 s，60℃退火及延伸30 s，共40个循环。β-actin作为内参基因，结果采用2-ΔΔCT方法计算基因的相对表达量。