《表2 IS900片段PCR扩增引物》

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《甘肃省奶牛副结核分枝杆菌的调查与分离鉴定》

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利用针对IS900片段的特异性引物进行PCR检测鉴定[11]。鉴定为MAP后，将每个分离株挑取单个菌落传代培养，对MAP进行纯化。传代培养的菌落再次进行PCR鉴定，确认培养物为MAP，并通过Ziehl-Neelsen染色方法在光学显微镜下检查细菌形态和染色特性。对IS900片段进行PCR扩增（引物见表2），反应程序：94℃3 min；94℃30 s，62℃15 s，72℃1 min，35个循环；72℃10 min，PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳鉴定。PCR产物被AwlⅠ限制性内切酶消化后进行琼脂糖凝胶电泳，则鉴定为MAP（表3)[11]。