《表1 PCR引物序列和PCR反应条件》

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《燕麦籽粒皮裸性相关AP2/ERF转录因子基因的克隆》

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参照天根植物DNA提取试剂盒说明书从试验材料的幼叶中提取基因组DNA。参照大麦Nud基因序列，在NCBI燕麦EST数据库、燕麦基因组测序数据库中以及本试验的转录组数据库中比对燕麦基因组中已有的同源性最高的基因序列。利用Primer 3在线软件设计合适的PCR引物。参照表1所示的试验条件，在CIav2921和CIav9008基因组DNA中进行目的基因扩增。扩增产物经TAE缓冲液琼脂糖凝胶电泳、溴化乙锭染色观察后，利用康为世纪Gel Extraction kit试剂盒对扩增产物进行纯化，然后采用Ta Ka Ra pMDTM18-T Vector试剂盒将纯化后的目的基因片段与T载体连接。将反应产物转化到大肠杆菌JM109感受态细胞，涂布于含有Amp抗性的LB固体平板上，对长出的单克隆进行阳性克隆验证，挑选正确的单克隆菌液送至华大公司进行测序。利用Bio Edit和DNAMAN软件对得到的测序序列数据进行比对分析。