《表1 测序克隆中插入的外源DNA位置信息》

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《利用高效的大片段DNA回收方法改良Fosmid文库的构建》

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由于28-45 kb的外源DNA片段包装后可高效进入λ噬菌体头部，本研究将第1至3孔的DNA混合，按照Williams等[30]的方法成功地构建了Fosmid文库。为了初步检测文库质量，随机挑选文库的10个单克隆，提取少量质粒DNA，用限制性内切酶Aat II和Eco72I作双酶切后进行PFGE分析发现，10个质粒均有外源DNA插入，文库阳性率为100%。但是，质粒的酶切产物条带过多，难以推测准确的外源DNA长度（数据未展示）。为了检测文库中外源DNA片段的准确大小，我们又随机挑选了25个单克隆进行双末端Sanger测序并成功获得了24个克隆的双末端序列，这些序列与蜀恢498的基因组序列[18]比对结果如表1所示，插入的外源DNA片段大小在23 kb-52 kb之间，每个克隆的平均插入片段大小约为37.9 kb，标准差为5.2 kb，片段大小比较集中。