《表3 采用不同色谱方法纯化不同来源的PPO》

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《多酚氧化酶的分离纯化及生理功能的研究进展》

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蛋白质分子由于自身性质的特殊性，可通过色谱的方法进行纯化。常用的色谱方法主要有离子交换色谱（IEX）、凝胶过滤（GF）、疏水相互作用（HIC）、反相色谱（RPC）和亲和色谱（AC）等[31]。色谱法的选择取决于多酚氧化酶的类型、电荷、分子量和杂质等。为了获得高纯度的目的蛋白，通常会将两种或两种以上的色谱法相结合进行操作[32-33]。如表3所示，通过离子交换色谱和凝胶过滤色谱，山药、花椰菜、人参果中PPO的纯化倍数分别提高了76.2，66和51倍[23-24，34]，富士苹果PPO仅用了一种色谱法，其纯化倍数也提高了64.3倍[25]，说明利用色谱法可以有效纯化多酚氧化酶。为了保证酶活性，大部分试验选择pH在6～8范围内的洗脱液，通过逐步的线性梯度洗脱以减少蛋白酶的损失。在进行色谱法之前，采用温度诱导分离法和双水相等提取方法，可以进一步增加酶的回收率[15，25，35]。色谱法可以有效实现高纯度PPO的纯化，为了提高其活性回收率，可以通过数学建模的方式优化色谱分离条件。