《表4 小麦分离纯化代表真菌类群》

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《小麦重要生育期和入仓阶段籽粒真菌污染及呕吐毒素积累情况分析》

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根据初步形态学鉴定结果，选择具有代表性菌株共计20株，编号WH001～WH020，进行基于18S r DNA的内转录间隔区（ITS）分子鉴定，经过DNA提取、通用引物ITS1和ITS4序列扩增，1%琼脂糖凝胶电泳检测，结果如图2所示，目的基因片段大小在500 bp左右，可以认为，扩增的片段为所需目的片段。将测序返回结果用Geneious 8.0.3软件查看峰图，确定序列可靠性，将经过校正的DNA序列上传到Genebank中进行Blast搜索，从中找出已公开发表且相似度最高的模式菌株，结果见表4。将序列和模式菌株序列导入Mega 7.0软件采用最大似然法（Maximum Likelihood，ML），迭代1 000次，构建系统发育树，如图3所示，WH001与Rhizopus oryzae亲缘关系最近，可鉴定为米根霉（Rhizopus oryzae)；WH002与Fusarium oxysporum关系最近，可鉴定为尖孢镰刀菌（Fusrium oxysporum)；WH003和WH004与Chaetomium globosum亲缘关系最近，可鉴定为球毛壳菌（Chaetomium globosum)；WH005与Fusarium equiseti亲缘关系最近，可鉴定为木贼镰刀菌（Fusarium equiseti)；WH006和WH008与Penicillium oxalicum亲缘关系最近，可鉴定为草酸青霉（Penicillium oxalicum)；WH007与Aspergillus flavus亲缘关系最近，可鉴定为黄曲霉（Aspergillus flavus)；WH009和WH010与Nigrospora oryzae亲缘关系最近，可鉴定为稻黑孢霉（Nigrospora oryzae)；WH011和WH015分别与Penicillium griseofulvum和Penicillium citrinum亲缘关系最近，可鉴定为橘青霉（Penicillium citrinum）和灰黄青霉（Penicillium griseofulvum)；WH012和WH017与Penicillium janthinellum亲缘关系最近，可鉴定为微紫青霉（Penicillium janthinellum)；WH013和Fusrium verticillioides亲缘关系最近，可鉴定为轮状镰刀菌（Fusrium verticillioides)；WH014与Talaromyces亲缘关系最近，可鉴定为篮状菌（Talaromyces)；WH016与Mucor circinelloides亲缘关系最近，可鉴定为卷枝毛霉（Mucor circinelloides)；WH018和WH019与Alternaria alternata亲缘关系最近，可鉴定为链格孢菌；WH020与Aspergillus niger亲缘关系最近，可鉴定为黑曲霉（Aspergillus niger）。通过分子生物学鉴定，确定了所分离9个属15个种真菌的分类地位，结果见表4。