《表1 免疫相关基因定量引物》

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《海豚链球菌simA和pgmA真核表达质粒对尼罗罗非鱼免疫保护的研究》

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合成IL-1β、TNF-α基因引物，以β-actin作为内参基因（序列见表1）；用TOYOBO试剂盒逆转录1μg从鳃、肝、肾脏、头肾中提取的RNA；所得cDNA稀释5倍，参照SYBR Green Realtime PCR Master Mix plus kit（TOYOBO）在冰上配制反应液，4℃、3 000×g离心3 min，放入Roche Light 480II，设置程序为：95℃5 min，95℃15 s，58℃15 s，72℃20 s，40个循环。反应完后分析溶解曲线和数据：定量仪自带的软件导出CT值，按照2-△△Ct法计算结果，以β-actin的mRNA表达量进行校正[16]。以PBS组为对照，设其mRNA表达量为1。