《表1 试验中相关引物信息》
基于本实验室测得的斜纹夜蛾幼虫转录组(SUB5323417,尚未公布)数据,找到了14个表皮蛋白基因。以此为目的基因,利用Beacon Designer 7设计特异性引物(表1)进行克隆。解剖斜纹夜蛾5龄幼虫中肠,采取TRIzol法提取样品总RNA,之后使用琼脂糖凝胶电泳和微量分光光度计对RNA纯度及完整性进行检测。取500 ng的总RNA为模板(其余贮存于-80℃备用),按照PrimeScriptTMRT Master Mix反转录试剂盒操作说明,获得cDNA第1链,并以其为模板,用r Taq酶进行PCR扩增,扩增体系:10×PCR Buffer 2.5μL,dNTP Mix 2.0μL,上下游引物各1.0μL,r Taq酶0.125μL,模板1.0μL,ddH2O补齐至25.0μL;扩增条件:94℃预变性3 min,然后94℃变性30 s,64℃退火1 min,72℃延伸2 min,共35个循环。扩增产物用质量分数为1.2%的琼脂糖凝胶电泳进行检测,之后将PCR产物送生工生物工程(上海)股份有限公司进行测序。
图表编号 | XD00166587500 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2020.07.15 |
作者 | 赵鹏、张帅、赵晨晨、胡方梅、崔金杰、李绍勤 |
绘制单位 | 华中农业大学植物科学技术学院、湖北省昆虫资源利用与害虫可持续治理重点实验室、中国农业科学院棉花研究所、棉花生物学国家重点实验室、中国农业科学院棉花研究所、棉花生物学国家重点实验室、华中农业大学植物科学技术学院、湖北省昆虫资源利用与害虫可持续治理重点实验室、中国农业科学院棉花研究所、棉花生物学国家重点实验室、华中农业大学植物科学技术学院、湖北省昆虫资源利用与害虫可持续治理重点实验室、中国农业科学院棉花研究所、棉花生物学国家重点实验室、中国农业科学院棉花研究所、棉花生物学国家重点实验室、华中农业大学植物科学技 |
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