《表1 试验中相关引物信息》

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《斜纹夜蛾表皮蛋白基因克隆及表达谱分析》

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基于本实验室测得的斜纹夜蛾幼虫转录组（SUB5323417，尚未公布）数据，找到了14个表皮蛋白基因。以此为目的基因，利用Beacon Designer 7设计特异性引物（表1）进行克隆。解剖斜纹夜蛾5龄幼虫中肠，采取TRIzol法提取样品总RNA，之后使用琼脂糖凝胶电泳和微量分光光度计对RNA纯度及完整性进行检测。取500 ng的总RNA为模板（其余贮存于-80℃备用），按照PrimeScriptTMRT Master Mix反转录试剂盒操作说明，获得cDNA第1链，并以其为模板，用r Taq酶进行PCR扩增，扩增体系：10×PCR Buffer 2.5μL，dNTP Mix 2.0μL，上下游引物各1.0μL，r Taq酶0.125μL，模板1.0μL，ddH2O补齐至25.0μL；扩增条件：94℃预变性3 min，然后94℃变性30 s，64℃退火1 min，72℃延伸2 min，共35个循环。扩增产物用质量分数为1.2%的琼脂糖凝胶电泳进行检测，之后将PCR产物送生工生物工程（上海）股份有限公司进行测序。