《表4 pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro-MST1引物序列》

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《调节小鼠ste20样激酶1的miRNA的筛选与功能验证》

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设计三对MST1的shRNA及一对control shRNA引物，将合成引物用无菌ddH2O溶解后按照1∶1比例混合，水浴煮沸5 min后自然冷却至室温。用BamHⅠ和EcoRⅠ同时双酶切退火引物及pGreen Puro载体，以1.3.3相同方法获得pGreen PuroshMST1重组载体，pGreen Puro-shMST1引物序列见表3。以AML-12肝细胞cDNA为模板，用PrimeSTAR R Max DNA Polymerase高保真扩增酶扩增MST1 CDS区。同样采用BamHⅠ和EcoRⅠ作为酶切位点同时双酶切过表达载体pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro与目的片段，pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro-MST1引物序列见表4，利用1.3.3相同方法获得MST1过表达重组载体。