《表1 基因测序技术比较：生物产业核心技术及产业发展趋势分析》

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《生物产业核心技术及产业发展趋势分析》

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1977年，Sanger通过引入双脱氧核苷三磷酸，实现了DNA的测序（Sanger法），基于Sanger法的测序技术也被称作第一代测序技术[4]。第一代测序技术的读长可达800～1000bp，测序准确率高达99.999%，但该方法通量较低，成本较高，限制了大规模、高通量的应用。随着测序技术的不断发展，焦磷酸测序法[5]、可逆链终止物和合成测序法[6]和连接测序法[7]等技术为标志的第二代测序技术开始兴起，基因测序进入了高通量并行时代。第二代测序技术降低了测序成本，大幅提高了测序速度，并且保持了99%的准确性，但除焦磷酸测序法可保证300～400bp的读长外，其他方法的读长相对较短。2008年以来，基于单分子测序的第三代测序技术开始兴起，即不通过PCR扩增，直接对每条DNA分子进行测序，从而降低PCR扩增导致的序列偏向性。但第三代测序技术在连续相同碱基序列区域错误率较高，仍无法单独使用。三代测序技术详细数据分析见表1。