《表2 精原干细胞介导的转基因动物模型》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《精原干细胞介导的基因编辑动物模型研究进展》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

1994年，Sato等[34]首次将pSV2-cat质粒注入小鼠睾丸，经检测发现附睾中的精子携带了目的基因，但将这些精子显微注射到卵子中，在1细胞的胚胎中并没有显示存在转基因的证据。2001年，Nagano等[35]利用逆转录病毒体外转染小鼠SSCs，获得阳性转基因后代。然而，研究发现，逆转录病毒可以转染几种类型的干细胞，如胚胎干细胞或造血干细胞等，但转入的外源基因的表达通常会减弱或沉默[36-38]。逆转录病毒在体外转染小鼠SSCs的整合效率和表达率很低[35]。2007年，Takehashi等[39]利用ROSA26启动子制备的腺病毒转染小鼠SSCs，从而获得了阳性转基因后代，但高浓度的腺病毒会影响SSCs的增殖速率。2005年，Kanatsu-Shinohara等[40]首次利用慢病毒修饰体外培养的SSCs并将其移植到受体小鼠后获得转基因后代。2014年，Casimir[41]以小鼠精子为转染目标，利用慢病毒介导产生转基因后代。2019年，Bang等[42]通过增强型绿色荧光蛋白为载体的慢病毒体内转染大鼠的SSCs，从而获得了转基因阳性后代。2017年，中科院昆明动物所郑萍团队利用慢病毒体外转染树鼩SSCs，获得转基因后代[11]。2010年，Shen等[43]利用DMSO介导质粒对兔子的生精细胞进行体内转染，从而获得阳性转基因后代。早在1999年，Farre等[44]利用腺病毒体外转染猪SSCs获得了阳性转基因后代。慢病毒介导的基因编辑目前在大动物的相关报道很少，主要是由于大动物SSCs体外培养条件不完善，不能长期增殖。慢病毒介导的转基因方法只能完成外源基因的过表达操作，还受限于病毒的接种时间，而且还需考虑病毒的嗜亲性、滴度、注射剂量以及启动子的构建。2015年，Chapman等[5]使用CRISPR/Cas9在大鼠SSCs中突变Epsti1和Erbb3基因，利用CRISPR/Cas9修饰的精原细胞在大鼠睾丸移植后再生精子，显示出长期形成精子的潜力并产生了非嵌合突变后代。在非人灵长类上，研究人员利用CRISPR/Cas9技术获得了携带多个基因突变的基因编辑食蟹猴，这是首次利用此技术实现了对非人灵长类进行精准的基因编辑[45]。这些研究为利用SSCs创制靶向基因编辑灵长类动物模型奠定了基础，在不久的将来有可能实现利用CRISPR/Cas9技术介导SSCs来创制靶向基因编辑的大动物模型。目前，通过精原干细胞或精子介导的转基因动物模型汇总见表2。