《表1 序列信息：人参皂苷20(S)-Rg3通过抑制DNMT3A介导的启动子甲基化促进卵巢癌细胞中抑癌基因VHL的表达》

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《人参皂苷20(S)-Rg3通过抑制DNMT3A介导的启动子甲基化促进卵巢癌细胞中抑癌基因VHL的表达》

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按照RNAFast 200试剂盒说明书提取细胞总RNA。核酸蛋白浓度分析仪检测RNA浓度和A260/280比值。采用反转录试剂盒Revert Aid first strand c DNAsynthesis Kit进行RNA反转录：总RNA 2μg，random hexamer primer 1μL，用nuclease-free water补足体积到12μL，在PCR仪中65℃5 min，然后冰上急冷5 min；再加入5×Reaction Buffer 4μL，d NTP Mixture 2μL，RNase Inhibitor 1μL，M-Mu LV Reverse Transcriptase 1μL，将PCR管放入预热的PCR仪，设置反应条件25℃5 min，42℃60 min，70℃5 min。将得到的c DNA保存于-20℃备用。按照SYBR Green Master Mix说明书进行realtime PCR反应：2×SYBR Premix Ex Taq 10μL，10μmol/L上、下游引物各0.4μL，c DNA 1μL，灭菌水7.4μL，realtime PCR反应条件为预变性95℃30 s，然后95℃5 s、60℃30 s，重复40个循环，之后接熔解曲线条件。采用CFX-96 real-time PCR system(Bio Rad）软件通过2-ΔΔCt方法计算基因的相对表达量。引物序列见表1。