《表1 抗CD19 CAR的LIC扩增引物》

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*小写字母部分为同源臂，大写字母部分为目的序列结合部。

本文通过同源重组的方式（LIC）进行目的载体的构建，不依赖连接酶。根据primer premier 6设计抗CD19-CAR的LIC扩增引物（表1），以合成的序列为模板，PCR扩增得到目的片段，电泳后切胶回收。Eco R V、Bstb I双酶切p T2/SVneo载体，将目的片段和酶切载体使用LIC方法构建，反应体系50 ng载体、50 ng目的片段、1μL Exonuclease III、1μL 10×EXO III Buffer，补水到10μL，置于PCR仪上4°C、60 min；85°C、5 min连接反应后转化。阳性克隆由生工生物公司测序鉴定。