《表2 PCR反应体系：水稻OsBGAL1基因的亚细胞定位分析》

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《水稻OsBGAL1基因的亚细胞定位分析》

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根据水稻OsBGAL1基因在NCBI数据库中序列设计引物，以日本晴c DNA为模板，PCR扩增带有Eco31I酶切位点的OsBGAL1的ORF全长（去除终止子）。PCR引物为OsBGAL1（+）:cagt GGTCTCacaacatgggg agggggtgcctggc；OsBGAL1（-）:cgat GGTCTCatgcagcgg tagagcataccg。采用50μL体系进行PCR反应，如表2所示。PCR反应程序为：95℃预变性3 min；95℃变性30 s，50℃退火40 s，72℃延伸100 s，30个循环；72℃延伸10 min。扩增完成后进行1.0%琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，对目的基因片段进行切胶回收并纯化。将载体pBWA（V）HS-GFP和纯化的基因片段用Eco31I进行酶切回收后，用T4连接酶连接载体和基因片段；随后转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，PCR筛选阳性克隆，提取质粒后进行酶切验证，并测序分析；保存测序正确的菌种并命名为pBWA（V）HS-OsBGAL1-GFP。