《表1 已知6种蜜蜂病毒9个株型的PCR检测引物》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《不同寄主来源的蜂箱奇露尾甲携带蜜蜂病毒情况调查》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

a～b：检测小甲虫分别源于中华蜜蜂和意大利蜜蜂。a-b:Tested small hive beetles from Apis cerana and Apis mellifera.

分子鉴定和携带病毒检测：为鉴定采集的小甲虫种类并检测其是否携带蜜蜂病毒，依据蜂箱奇露尾甲COI基因序列引物（F:5′-GCTAAGTTAACTGA-AGATCCACCAT-3′/R:5′-TAGTTCCACTAATACTA-AGAGCCCC-3′）扩增约193 bp目的片段，并根据已知的以色列急性麻痹病毒（Israeli acute paralysis virus，IAPV）、SBV、急性蜜蜂麻痹病毒（acute bee paralysis virus，ABPV）、黑蜂王台病毒（black queen cell virus，BQCV）、慢性麻痹病毒（chronic bee paralysis virus，CBPV）、DWV-A、DWV-B、中蜂囊状幼虫病毒（Chinese sacbrood virus，CSBV）、Kakugo virus(DWV-A/KV）共6种蜜蜂病毒9个株型分别设计其特异性引物（表1），引物均由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。分别取50只供试小甲虫的幼虫和成虫，75%酒精表面消毒后，参照说明书于Trizol提取液中分别提取总RNA，并经过反转录得到cDNA，以此为模板进行PCR扩增。20μL PCR反应体系：模板cDNA 2μL、2×Go Taq Mix 10μL、上下游引物各1μL，无菌水补足至20μL。反应程序：94℃预变性3 min；94℃变性45 s，55℃（COI序列，其余病毒检测时设置相应退火温度）退火30 s，72℃延伸1 min，33个循环；72℃延伸10 min。PCR产物经含0.5 mg/mL溴化乙锭的1.2%琼脂糖凝胶电泳检测，明确小甲虫分类地位及其携带蜜蜂病毒的情况。